1. 产品概述

生物素连接酶(Biotin Ligase,BirA)是大肠杆菌BirA基因编码的双功能蛋白质,能识别蛋白质分子的特异性序列(Avi tag),使蛋白质生物素化。该酶带有6his标签，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA去除。

图示说明：SUMO蛋白酶工作原理

2. 产品规格

备注酶活：30℃条件下，0.02 ug SUMO Protease 1小时酶切2 ug含有酶切位点的融合蛋白，酶切效率达85%。

3. 储存条件

-80℃冰箱储存，避免反复冻融。【建议首次开启试剂盒后，根据需要进行分装】。  

4.  参考实验流程

1) 在EP管中配制如下反应体系（建议）

融合蛋白：SUMO Protease=100：1

2)  30℃ 孵育，在0.5、1、2、4、8小时分别吸出20 μL上述反应液，置于单独的EP管中。

3) 向上述EP管中加入5 μL 4×SDS Loading Buffer，置于-20℃。

4)  样品全部反应完毕后，样品煮沸8 min，取20 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。

5)  根据酶切小试结果进行放大酶切。

6) 酶切反应完成后SUMO蛋白酶的去除

通常融合蛋白N端会带有6xHis-SUMO标签，酶切完成后可通过Ni柱去除SUMO蛋白酶以及酶切下来的6xHis-SUMO标签，SUMO蛋白酶以及6xHis-SUMO标签会挂柱，流穿液为所需去除标签后的样品。

5. 注意事项

最优酶切温度30℃，该酶在4℃-30℃均有较好酶切活性，酶切Buffer PH 5.5-9.0均可，如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，延长反应时间，并增加SUMO酶用量，以保证酶切效果。SUMO 蛋白酶长期储存于-80℃，或解冻后保存于-20℃。首次使用后建议分装后保存，避免在-80°C下多次冻融循环。

6. 展示数据

图示说明：Lane 1为6xHis-SUMO-Protein工具酶；Lane 2为30℃ 恒温金属浴震荡酶切原液；

Lane 3为蛋白酶切纯化后的样品，蛋白纯度>95%。