背景

ØClaudin18是位于细胞膜表面紧密连接的主要成分，它在维持细胞极性和屏障功能以及促进耐酸能力方面起着重要作用。CLDN18的第一个外显子可以选择性剪接，形成两个具有高度同源氨基酸序列的不同剪接突变体(CLDN18.1和CLDN18.2)。跨膜蛋白CLDN18由两个细胞外环、四个跨膜结构域和一个细胞质结构域组成。

ØClaudin18.2最初被确定为胃肿瘤特异性靶点，许多针对Claudin18.2的单克隆抗体用于治疗胃癌和胃食管癌患者的临床试验。然而，近年来，包括嵌合抗原受体T (CAR-T)疗法、双特异性抗体和抗体-药物偶联物(ADC)在内的其他几种新型靶向治疗方法迅速出现，并进行了各种相应的临床试验，这些试验扩大了它们对人群的治疗适应性，特别是对胃肠道癌症患者的治疗适应性。

细胞形态

说明

细胞名称：HGC-27 Claudin18.2

宿主细胞：HGC-27

表达基因：Claudin18.2

稳定性：32 passages

种属来源：人

组织来源：胃

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:：DMEM+10%FBS+1%PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

抗原表达检测

细胞培养操作

Ø复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4mL培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心3min，弃去上清液，加1-2mL培养基后吹匀。然后将所 有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

Ø细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将 培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变 圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装 入无菌离心管中，1000rpm离心5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

Ø细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用 PBS 清洗一遍，弃尽PBS，加 1mL血清重悬细胞，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存 管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、 将冻存管放入-80℃冰箱，24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

Ø培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁 将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900rpm-1000rpm离心3min，弃上清 。加5mLPBS重悬细胞，再900rpm-1000rpm离心3min，，用新鲜的完全培养基重悬细 胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5.  请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7.  该细胞仅供科研使用。

8. PS：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 (注意：1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm 皿)。